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    非洲豬瘟檢測試劑盒產(chǎn)品說明

    更新時(shí)間:2021-01-27

    瀏覽次數(shù):1415

      非洲豬瘟檢測試劑盒_FT-FWSJ_風(fēng)途批發(fā)_非洲豬瘟檢測試劑盒_Kopete ya go lemoga ga sešireletši sa swine sa Afrika_專業(yè)好試劑選風(fēng)途更靠譜

      非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒引起的一種高度接觸傳染性、廣泛出血性豬病毒病,死亡率可高達(dá) 100%,無商品化疫苗可用。自今年 8 月初我國爆發(fā)*非洲豬瘟疫情以來,截至 11 月 5 日,短短三個(gè)月時(shí)間里,已有 14 個(gè)省累計(jì)爆發(fā) 58 起疫情,撲殺生豬近 50 萬頭,直接經(jīng)濟(jì)損失數(shù)十億元,給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大沖擊。面對來勢洶洶的非洲豬瘟疫情,我國的應(yīng)對是果斷有力的,但也面臨種種挑戰(zhàn)。

    非洲豬瘟檢測試劑盒

      【產(chǎn)品名稱】

      通用名稱:病毒DNA提取試劑盒

      英文名稱:Extraction Kit for Virus DNA

      【預(yù)期用途】

      本試劑盒主要用于疑似病毒等病原感染抗凝血、血淸、拭子、組織、飼料及環(huán)境中的病毒DNA的提取,純化的核酸可適用于各種常規(guī)操作及PCR試驗(yàn)。

      【試劑盒組分】

      I、試劑盒組成及貯藏條件

    名稱

    20 T

    50 T

    1、吸附柱

    20個(gè)

    50個(gè)

    2、收集管

    20個(gè)

    50個(gè)

    3、裂解液

    mL

    11 mL

    4、洗液I

    13 mL

    32 mL

    5,洗液II

    13 mL

    32 mL

    6.洗脫液

    1.2 mL

    3 mL

      2、 保存條件及有效期:室溫下保存,有效期12個(gè)月.

      3、 需自備材料:無水乙醇、1.5 mL無菌離心管、1.5 mL無菌離心管(長臂型)、生理鹽水、研缽、無菌

      1mL, 2OOuL、10uL槍頭、記號筆等。

      【操作步驟】

      一、樣品制備

      1、 血液樣品:抗凝血樣品置離心管中,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上層血漿;非抗凝血樣品置離心 管中,待凝固后,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上層血清,置于滅菌離心管中,編號待檢。

      2、 組織樣品:采集脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體等病變組織樣品0.1g.組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨,加入1 mL生理鹽水混勻,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心骨中,編號待檢。

      3、 口腔液:進(jìn)食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉線綁紗布團(tuán)吸引動(dòng)物咀嚼,收集口腔液大于 500uL, 8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號待檢。

      4、 飼料:取適量研磨后的飼料(約0.2g),放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP 管屮,振蕩混勻,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號待檢.

      5、 灰塵:用無菌棉簽蘸取適量環(huán)境表面上的灰塵,放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP管中,振蕩混勻,8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,取上清于滅菌離心管中,編號待檢。

      二、DNA的提取

      1、取裂解液200uL加入無核酸酶1.5 mL離心曾屮,分別加入血漿/血清/組織液等樣品液200uL. 震蕩混勻10秒或顛倒混勻10次,室溫放置5分鐘(如果室內(nèi)溫度較低時(shí).需放置25C水浴溫育),再加入200uL無水乙醇,顛倒混勻10秒;若樣品渾濁則先12000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘處理,取上清液,以避免堵塞柱子;

      2、 將液體轉(zhuǎn)入套有收集管的吸附柱中, 12000rpm離心1分鐘:

      3、 棄收集管液體,向吸附柱中加600uL洗液I , 12000 rpm離心1分鐘;

      4、 棄收集管液體,向吸附柱中加600uL洗液II, 12000 rpm離心I分鐘;

      5、 棄收集管液體,12000 rpm離心2分鐘,以*去除殘留洗液;

      6、將吸附柱轉(zhuǎn)入新的無核酸酸1.5mLEP管(長臂型)中,向柱中央滴加50 uL洗脫液,靜置1分鐘, 12000 rpm離心1分鐘,EP管中液體即為病毒DNA。

      【注意事項(xiàng)】

      1、 實(shí)驗(yàn)前諾仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書,嚴(yán)格按照操作步驟執(zhí)行.在操作過程中對時(shí)間、試劑體積等 粘確控制可以獲得好的結(jié)果。

      2, 樣本應(yīng)新鮮采集使用,或低溫運(yùn)輸儲存;

      3, 樣本具有潛在感染風(fēng)險(xiǎn),核酸的提取應(yīng)在核酸提取實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜中進(jìn)行。

      4、 核酸提取冇關(guān)耗材確保高溫滅菌,提取后核酸盡快進(jìn)入下一步試驗(yàn)或冷凍保存待用。

      5, 試劑使用前應(yīng)混合均勻,試劑具有一定腐蝕性,使用時(shí)請戴手套、口罩做好防護(hù)。

      6. 低溫下裂解液出現(xiàn)結(jié)晶數(shù)屬正常現(xiàn)象,可在60°C水浴加熱助溶后使用。

      7、 實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)及時(shí)收集,遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行無害化處理。

      僅供獸醫(yī)診斷使用

      非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書

      【獸藥名稱】

      通用名稱:非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒

      漢語拼音:Feizliouzhuwen Bingdu Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe

      英文名稱:African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic Kit

      商品名稱:無

      【主要成分與含量】試劑盒中含有如下組分:

    試劑盒組分

    含量

    陽性對照

    250μL/管×1管

     

    陰性對照

    250μL/管×1管

     

    PCR反應(yīng)液

    850μL/管×1管

     

    萌混合液

    150μL/管×1管

     

    說明書

    1份/盒

    【作用與用途】 本試劑盒可用于血液、脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、 樣品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。

    扁桃體、腎臟、肌肉、環(huán)境樣品等

      【用法與判定】

      1 用法

      1.1待檢樣品釆集、保存及運(yùn)輸

      1.1.1樣品釆集

      (1) 活豬樣品 無菌采集抗凝血或血清5mL

      (2) 病死豬剖檢樣品或屠宰場剖檢樣品 無菌采集死豬的牌、肺、腎、扁桃體、淋巴結(jié)、肌肉等組織樣品。2?8°C低溫運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室用于檢測。

      (3) 病豬污染的周邊環(huán)境 采集與病豬相關(guān)場所的糞便、飼料、污水樣品。2?8°C低溫運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室用于檢測。

      1.1.2樣品保存 采集的樣品在2?8°C保存應(yīng)不超過24小時(shí),-70°C條件下保存,避免反復(fù)凍 融。

      1.1.3樣品運(yùn)輸泡沫箱加冰袋后密封進(jìn)行運(yùn)輸。包裝和運(yùn)輸應(yīng)符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村《高致病性動(dòng) 物病原微生物菌(毒)種或者樣品運(yùn)輸包裝規(guī)范》和交通運(yùn)輸門關(guān)于危險(xiǎn)品運(yùn)輸管理的有關(guān)規(guī)定。

      1.2樣品處理

      1.2.1血液樣品處理 抗凝血樣品置于離心管中,8000 r/min離心2分鐘取上層血漿,編號待 檢。非抗凝血樣品置于離心管中,待凝固后,8000 r/min離心2分鐘取200μL上層血清,編號待檢。

      1.2.2組織樣品處理取適量脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體、肌肉等組織,置于研磨器或研磨管中研磨,再加適量生理鹽水混勻,制成約10%的組織勻漿,8000 r/min離心2分鐘,取200μL上 清于RNase/DNase-free無菌離心管中,編號備用。

      1.2.3環(huán)境樣品處理

      1.2.3.1糞便、飼料樣品處理方法取適量的糞便、飼料放入盛有PBS緩沖液的研磨管中研磨混勻,制成約10%的勻漿液.8000 r/min離心2分鐘,取200μL上清于RNase/DNase-free無菌離心 管中,編號備用。

      1.2.3.2污水樣品處理方法 直接取200μL污水進(jìn)行核酸提取。

      1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法進(jìn)行DNA核酸提取。

      1.4熒光PCR反應(yīng):

      1.4.1從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液、酶混合液,室溫融化后,2000 r/min離心5秒。設(shè)被 檢樣品、陽性對照和陰性對照總和為n,則反應(yīng)體系配制如下:

      試劑 體系

      PCR 反應(yīng)液 17× (n+1) μL

      酶混合液 3× (n+1) μL

      1.4.2在新的RNase/DNase-fire 1.5 ml離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20μL/ 管分裝量將試劑分裝至熒光PCR反應(yīng)管。

      1.4.3在上述制備好的熒光PCR反應(yīng)管中分別加入陰性對照、陽性對照各5μL、處理好的待測核酸各5μL,終體積25μL/管,蓋好熒光PCR反應(yīng)管蓋,混勻后瞬時(shí)離心,轉(zhuǎn)移到熒光PCR儀器 上。

      144將PCR反應(yīng)管放置在熒光PCR儀樣品槽中,在熒光PCR儀上運(yùn)行以下程序:

    步驟

    條件

    循環(huán)數(shù)

    UNG處理

    50 ℃2分鐘

    1

    預(yù)變性

    95 ℃3分鐘

    1

    預(yù)擴(kuò)增

    95 ℃: 8 秒 55 ℃: 8 秒

     

    5

    PCR擴(kuò)増

    95 ℃: 8 秒 55 ℃: 8 秒

     

    40

      熒光通道選擇FAM,在PCR擴(kuò)增階段每個(gè)循環(huán)的55℃時(shí)采集熒光信號。設(shè)置擴(kuò)增體系為25μL, 同時(shí)要選擇passive reference和quencher為none的模式。(注:若熒光PCR儀(如AB17500)按說明 書中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時(shí)間短無法運(yùn)行,可將預(yù)擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增條件變更為95C: 5秒 55°C: 30 秒)

      2結(jié)果判定

      2.1試驗(yàn)有效性判定

      陽性對照有典型擴(kuò)增曲線且Ct值≤30.且陰性對照無Cl值或無擴(kuò)增曲線,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增。則判試驗(yàn)結(jié)果有效。否則,此次試驗(yàn)視為無效。

      2.2樣品判定

      2.2.1陽性:樣本檢測結(jié)果Ct值≤35且有明顯指數(shù)增,判定檢出非洲豬瘟病毒核酸。

      2.2.2可疑:樣本檢測結(jié)果Ct值在35?38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對樣本進(jìn)行重復(fù)檢測,如果重復(fù)實(shí)驗(yàn) 結(jié)果Ct值仍在35?38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增.則判定為陽性,否則為陰性。

      2.2.3陰性:樣本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值,判定未檢出非洲豬瘟病毒核酸。

      【注意事項(xiàng)】(1)實(shí)驗(yàn)前請仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書,嚴(yán)格按照操作步驟執(zhí)行,在操作過 程中對時(shí)間、試劑體積等準(zhǔn)確控制可以獲得好的結(jié)果。

      (2) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照有關(guān)規(guī)定分區(qū)管理,依照配液區(qū)-模板提取區(qū)-擴(kuò)增區(qū)-分析區(qū)順序 進(jìn)行基因檢測。各區(qū)間人員、器材、試劑及空氣流向應(yīng)有嚴(yán)格要求。

      (3) 核酸提取有關(guān)耗村確保潔凈、無DNase/RNase,提取過程盡量低溫、快速,完成后進(jìn)入 下一步實(shí)驗(yàn)或凍保。

      (4) 對于頂采光儀器要帶新的一次性PE手套對熒光PCR管封蓋,對于底采光儀

      器要避免徒手或使用過的手套接觸熒光PCR管底,檢測過程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套。

      (5) 凍存試劑使用前應(yīng)于室溫下*融化,瞬時(shí)離心使液體*沉于管底。避免反復(fù)凍融, 以免影響試劑性能。

      (6) 樣品、陽性對照等在使用后及時(shí)封蓋,.避免組分間及氣溶膠等的污染造成假陽性。

      (7) 擴(kuò)增產(chǎn)物禁止開蓋,實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)及時(shí)收集,遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行無害化處理。

      【規(guī)格】50頭份/盒

      【貯藏與有效期】試劑盒置-20°C以下避光保存,有效期12個(gè)月。

      【批準(zhǔn)文號】獸藥生字163668871

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