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    非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒簡單介紹

    更新時間:2021-01-28

    瀏覽次數(shù):1448

    非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒【品牌|生產(chǎn)廠家|公司|型號】

    非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒生產(chǎn)廠家選擇競道,競道出品,保證精品。

    非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒型號為FT-ZWSJ1,可定制參數(shù),滿足您的各項需求。

    非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒*。競道廠家無套路直供,每天都是雙十一。實力保證,質(zhì)量保證。

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    非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒

    由于豬瘟病毒的抗原逐漸從單個或者團細胞中出現(xiàn),并且開始發(fā)展到全的機制細胞內(nèi)。所以,在豬瘟病毒侵入到皮膚的生發(fā)層、舌的中間層和涎腺、扁桃體一個身體的各個細胞組織之中后,能夠直接在晚期的發(fā)病中,推動其皮膚內(nèi)出現(xiàn)出血變色的情況、同時還伴隨著粒細胞的增多、神經(jīng)系統(tǒng)的紊亂癥狀。

    【獸藥名稱】

    通用名稱:非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒

    漢語拼音:Feizliouzhuwen Bingdu Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe

    英文名稱:African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic Kit

    商品名稱:無

    【主要成分與含量】試劑盒中含有如下組分:

    【主要成分與含量】試劑盒中含有如下組分:

    試劑盒組分

    含量

    陽性對照

    250μL/管×1管

     

    陰性對照

    250μL/管×1管

     

    PCR反應液

    850μL/管×1管

     

    萌混合液

    150μL/管×1管

     

    說明書

    1份/盒

    【作用與用途】 本試劑盒可用于血液、脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、 樣品中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。

    扁桃體、腎臟、肌肉、環(huán)境樣品等

     

    【用法與判定】

    1 用法

    1.1待檢樣品釆集、保存及運輸

    1.1.1樣品釆集

    (1) 活豬樣品 無菌采集抗凝血或血清5mL

    (2) 病死豬剖檢樣品或屠宰場剖檢樣品 無菌采集死豬的牌、肺、腎、扁桃體、淋巴結(jié)、肌肉等組織樣品。2?8°C低溫運至實驗室用于檢測。

    (3) 病豬污染的周邊環(huán)境 采集與病豬相關(guān)場所的糞便、飼料、污水樣品。2?8°C低溫運至實驗室用于檢測。

    1.1.2樣品保存 采集的樣品在2?8°C保存應不超過24小時,-70°C條件下保存,避免反復凍 融。

    1.1.3樣品運輸泡沫箱加冰袋后密封進行運輸。包裝和運輸應符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村《高致病性動 物病原微生物菌(毒)種或者樣品運輸包裝規(guī)范》和交通運輸門關(guān)于危險品運輸管理的有關(guān)規(guī)定。

    1.2樣品處理

    1.2.1血液樣品處理 抗凝血樣品置于離心管中,8000 r/min離心2分鐘取上層血漿,編號待 檢。非抗凝血樣品置于離心管中,待凝固后,8000 r/min離心2分鐘取200μL上層血清,編號待檢。

    1.2.2組織樣品處理取適量脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體、肌肉等組織,置于研磨器或研磨管中研磨,再加適量生理鹽水混勻,制成約10%的組織勻漿,8000 r/min離心2分鐘,取200μL上 清于RNase/DNase-free無菌離心管中,編號備用。

    1.2.3環(huán)境樣品處理

    1.2.3.1糞便、飼料樣品處理方法取適量的糞便、飼料放入盛有PBS緩沖液的研磨管中研磨混勻,制成約10%的勻漿液.8000 r/min離心2分鐘,取200μL上清于RNase/DNase-free無菌離心 管中,編號備用。

    1.2.3.2污水樣品處理方法 直接取200μL污水進行核酸提取。

    1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法進行DNA核酸提取。

    1.4熒光PCR反應:

    1.4.1從試劑盒中取出熒光PCR反應液、酶混合液,室溫融化后,2000 r/min離心5秒。設被 檢樣品、陽性對照和陰性對照總和為n,則反應體系配制如下:

    試劑 體系

    PCR 反應液 17× (n+1) μL

    酶混合液 3× (n+1) μL

    1.4.2在新的RNase/DNase-fire 1.5 ml離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20μL/ 管分裝量將試劑分裝至熒光PCR反應管。

    1.4.3在上述制備好的熒光PCR反應管中分別加入陰性對照、陽性對照各5μL、處理好的待測核酸各5μL,終體積25μL/管,蓋好熒光PCR反應管蓋,混勻后瞬時離心,轉(zhuǎn)移到熒光PCR儀器 上。

    144將PCR反應管放置在熒光PCR儀樣品槽中,在熒光PCR儀上運行以下程序:

    步驟

    條件

    循環(huán)數(shù)

    UNG處理

    50 ℃, 2分鐘

    1

    預變性

    95 ℃, 3分鐘

    1

    預擴增

    95 ℃: 8 秒 55 ℃: 8 秒

     

    5

    PCR擴増

    95 ℃: 8 秒 55 ℃: 8 秒

     

    40

     

    熒光通道選擇FAM,在PCR擴增階段每個循環(huán)的55℃時采集熒光信號。設置擴增體系為25μL, 同時要選擇passive reference和quencher為none的模式。(注:若熒光PCR儀(如AB17500)按說明 書中的反應程序設置后因持溫時間短無法運行,可將預擴增和PCR擴增條件變更為95C: 5秒 55°C: 30 秒)

    2結(jié)果判定

    2.1試驗有效性判定

    陽性對照有典型擴增曲線且Ct值≤30.且陰性對照無Cl值或無擴增曲線,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增。則判試驗結(jié)果有效。否則,此次試驗視為無效。

    2.2樣品判定

    2.2.1陽性:樣本檢測結(jié)果Ct值≤35且有明顯指數(shù)增,判定檢出非洲豬瘟病毒核酸。

    2.2.2可疑:樣本檢測結(jié)果Ct值在35?38范圍內(nèi)。此時應對樣本進行重復檢測,如果重復實驗 結(jié)果Ct值仍在35?38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增.則判定為陽性,否則為陰性。

    2.2.3陰性:樣本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值,判定未檢出非洲豬瘟病毒核酸。

    【注意事項】(1)實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書,嚴格按照操作步驟執(zhí)行,在操作過 程中對時間、試劑體積等控制可以獲得好的結(jié)果。

    (2) 實驗室應嚴格按照有關(guān)規(guī)定分區(qū)管理,依照配液區(qū)-模板提取區(qū)-擴增區(qū)-分析區(qū)順序 進行基因檢測。各區(qū)間人員、器材、試劑及空氣流向應有嚴格要求。

    (3) 核酸提取有關(guān)耗村確保潔凈、無DNase/RNase,提取過程盡量低溫、快速,完成后進入 下一步實驗或凍保。

    (4) 對于頂采光儀器要帶新的一次性PE手套對熒光PCR管封蓋,對于底采光儀

    器要避免徒手或使用過的手套接觸熒光PCR管底,檢測過程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套。

    (5) 凍存試劑使用前應于室溫下*融化,瞬時離心使液體*沉于管底。避免反復凍融, 以免影響試劑性能。

    (6) 樣品、陽性對照等在使用后及時封蓋,.避免組分間及氣溶膠等的污染造成假陽性。

    (7) 擴增產(chǎn)物禁止開蓋,實驗產(chǎn)生的廢棄物應及時收集,遠離PCR實驗室進行無害化處理。

    【規(guī)格】50頭份/盒

    【貯藏與有效期】試劑盒置-20°C以下避光保存,有效期12個月。

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